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ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項
點擊次數：2760 更新時間：2020-10-15
 　　一、ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項：
　　1、ABI7500熒光定量PCR儀目的條帶很亮，但是邊沿不清楚，前后有拖尾現象。出現這樣的問題，則需要進行細致的分析，因為引起該問題的可能很多。
　　2、可先檢查是否模板質量問題，如有降解等，模板應避免反復凍融。也有可能是抽提RNA時有污染，則需要重新抽提RNA。
　　3、此外，也可能是非特異性擴增引發該問題，可提高退火溫度，少循環次數。電泳緩沖液時間太長，ph值和鹽離子濃度明顯改變、電泳時電壓太高、電泳液過久沒換，電泳膠臟了等都可能引發該問題。
　　4、如果不是由上述原因引起，則進一步檢查加樣量是否過大，制膠過程中膠孔是否制好，EB是否沖洗干凈、模板中是否混有基因組DNA或蛋白等。也需考慮是否擴增的條件不合適。針對具體原因再采取相應的措施。
　　5、PCR產物何時需要用凝膠純化，何時不需要？當凝膠分析擴增產物只有一條帶時，則不需要使用凝膠純化。當可見其他雜帶時，則可能是積累了大量引物的二聚體，在克隆前需要做凝膠純化。
　　6、如果實驗中沒有回收到目的片段，則需要繼續進行對照實驗。包括涂布未轉化的感受態細胞、轉化完整質粒，計算菌落生長數，測定轉化效率、用標準載體，連接對照，轉化高頻率感受態細胞，按照的實驗步驟進行。
　　7、實驗中出現假陽性擴增該怎么辦？這是擴增系統受到污染的表現，應通過檢查排除污染源。先考慮是否為試劑污染，可將試劑分裝好直接置于PCR儀中擴增進行判斷。
　　8、其次要考慮是否為實驗室污染，可更換所用的移液器、吸咀管（離心管）等，將試驗中的關鍵步驟轉移到一個新的環境中，判斷是否為實驗室污染。
　　9、如果是則需要對整個實驗室及實驗器材*清洗處理，保持良好的通風、清潔等。此外，還要考慮是否為采樣污染，一般表現為一批結果陽性率很高，一批結果陽性率又下降很多，如此反復。解決方法為盡量使用一次試管及吸咀取樣。
　　總結：ABI7500熒光定量PCR儀的使用注意事項小編就分享到這了，看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧！總的來說，希望對大家有所幫助。